Il y a souvent des problèmes d'un type ou d'un autre dans le processus de culture cellulaire. Ne sous-estimez pas la culture cellulaire, mais elle contient des questions universitaires. En communiquant avec les utilisateurs, vous trouverez de nombreux problèmes qui peuvent être évités. Les éléments suivants sont courants dans le processus de culture cellulaire. Analysez la cause de l'anomalie.
pain béni
1. Les cellules cultivées n'adhèrent pas au mur
raison possible
1. Digestion excessive de trypsine;
2. Contamination par les mycoplasmes ;
3. Le pH du milieu est trop alcalin (décomposition du NaHCO3) ;
4. Vieillissement cellulaire ;
5. La concentration initiale de cellules inoculées est trop faible ou trop élevée.
Solution
1. Raccourcir le temps de digestion de la trypsine ou réduire la concentration de trypsine ;
2. Isoler la culture et détecter les mycoplasmes. Nettoyez le support ou l'incubateur. Si une contamination par des mycoplasmes est détectée, jetez la culture ;
3. Utilisez une solution d'acide acétique stérile pour ajuster le pH ou remplissez avec du CO2 stérile ;
4. Activer de nouvelles cellules de conservation ;
5. Ajuster la concentration optimale de cellules inoculées.
2. Regroupement des cellules en suspension
raison possible
1. Le milieu de culture contient des ions calcium et magnésium ;
2. Contamination par les mycoplasmes ;
3. La digestion excessive par la protéase provoque la lyse cellulaire ;
4. Contamination par l'ADN.
Solution
1. Laver les cellules avec une solution saline équilibrée sans calcium ni magnésium, puis souffler et aspirer doucement
2. Les cellules obtiennent une suspension cellulaire unique ;
3. Séparer la culture et détecter les mycoplasmes ;
4. Traitement au DNasel des cellules.
3. Les cellules cultivées se développent lentement
raison possible
1. En raison du remplacement de différents milieux de culture ou sérums ;
2. Certains composants nécessaires à la croissance cellulaire dans le milieu de culture, tels que la glutamine ou les facteurs de croissance, sont épuisés ou manquent ou ont été détruits ;
3. Il y a une petite quantité de contamination bactérienne ou fongique dans la culture ;
4. Stockage inapproprié des réactifs ;
5. La concentration initiale de cellules inoculées est trop faible ;
6. Les cellules ont vieilli ;
7. Contamination par les mycoplasmes.
Solution
1. Comparez la composition du nouveau milieu et du milieu d'origine, comparez le nouveau sérum et l'ancien sérum pour soutenir les expériences de croissance cellulaire, et laissez les cellules s'adapter progressivement au nouveau milieu ;
2. Passer au milieu de culture fraîchement préparé ou ajouter de la glutamine et des facteurs de croissance ;
3. Utilisez un milieu de culture sans antibiotique pour la culture, s'il s'avère qu'il est contaminé, jetez la culture ;
4. Le sérum doit être conservé entre -10 et -20 degrés. Le milieu de culture doit être stocké à 2-8 degré dans l'obscurité. Le milieu de culture complet contenant du sérum doit être stocké à 2-8 degré et doit être utilisé en 1 semaine ;
5. Augmenter la concentration initiale de cellules inoculées ;
6. Changer pour une nouvelle cellule de conservation ;
7. Isoler la culture et détecter les mycoplasmes. Nettoyez le support et l'incubateur. Si une contamination par des mycoplasmes est détectée, jetez la culture.
Quatrièmement, les cellules cultivées se développent mal
raison possible
A. L'état de la cellule elle-même
1. Le nombre de passages cellulaires est important et les cellules vieillissent.
2. Quantité d'inoculation cellulaire : quantité d'inoculation trop faible, croissance cellulaire lente ;
3. Le passage des cellules est trop tardif : empoisonnement cellulaire, qui affecte la croissance des cellules après passage ;
4. Le temps de digestion de la trypsine est trop long ou trop court : si le temps est trop long, les cellules meurent ; si le temps est trop court, les cellules ne sont pas complètement séparées en grappes et les cellules meurent ;
5. Cryoconservation et récupération des cellules : congélation lente et lyse instantanée.
B.Pollution
1. Contamination par les mycoplasmes ;
2. Contamination par les moisissures.
C, milieu de culture ou sérum
1. Aucune validation avant remplacement du sérum ou du milieu ;
2. Si le support sélectionné est adapté ;
3. Si la préparation du milieu est appropriée ;
4. Si la préparation du milieu est exacte.
D. cultiver l'environnement
1. L'apport de CO2 est-il normal ?
2. La température de l'incubateur ou de l'agitateur est correctement contrôlée.
Solution
Selon les quatre raisons possibles ci-dessus, apportez des solutions ciblées
1. Faites attention à l'état des cellules : tel que le nombre de passages, la quantité d'inoculation, etc. ;
2. Eviter la pollution (utiliser du sérum régulier, légal et traçable) ;
3. Utiliser un sérum ou un milieu approprié, de préférence vérifié ;
4. Faites attention à l'environnement du laboratoire.
Causes possibles de mort cellulaire en culture
1. Il n'y a pas de CO2 dans l'incubateur ;
2. La température dans l'incubateur fluctue trop ;
3. Les cellules sont endommagées pendant la cryoconservation ou la récupération ;
4. La pression osmotique du milieu de culture est incorrecte ;
5. Accumulation de métabolites toxiques dans le milieu de culture.
Solution
1. Détecter le CO2 dans l'incubateur ;
2. Vérifiez la température dans l'incubateur ;
3. Prendre une nouvelle espèce de cellule préservée ;
4. Détecter la pression osmotique du milieu de culture ;
5. Passer au milieu de culture frais ;