Pour les boîtes de Pétri à fond de verre courantes sur le marché, un trou est généralement pratiqué au fond d'une boîte de Pétri en plastique, puis une lamelle de verre ou de cellule d'une épaisseur de 170-220 μm est collée au fond de la boîte de Pétri avec de la colle sans ombre ou du gel de silice. Tout le fond de la boîte de Pétri n'est pas en verre. La zone appropriée pour l'observation se situe uniquement dans la zone de la perforation. Cependant, en raison de l'hydrophobicité du verre, lors de la culture de cellules, les cellules ne peuvent pas bien adhérer au verre, et l'état de croissance n'est pas bon, et même le phénomène de délaminage cellulaire se produit lors de l'imagerie confocale à balayage.
Pour que les cellules adhèrent bien, il est nécessaire de confirmer que des réactifs protéiques spécifiques ont été enrobés avant d'utiliser des plats à fond de verre pour la culture cellulaire.
couette à faire soi-même
Différentes cultures cellulaires nécessitent différents réactifs de revêtement. Dans le même temps, étant donné que la protéine utilisée pour l'enrobage est un produit biologique, la pureté du produit et le dosage de la protéine d'enrobage de différentes sociétés sont différents. Ce poste technique est uniquement à titre de référence. Le dosage spécifique des réactifs de revêtement doit se référer aux instructions des marques utilisées. . Et il est préférable de faire une expérience de gradient avec les réactifs que vous utilisez pour trouver la concentration de revêtement la plus appropriée.
Voici un exemple de Poly-L-Lysine (PLL, sigma, P4832, 100ug/ml):
Le revêtement PLL convient à la grande majorité des cellules, en particulier pour la culture des neurones du système central. Il est nécessaire de faire la teneur en protéines (ug/cm2) par unité de surface pour atteindre la quantité désirée lors de l'utilisation. La quantité recommandée de revêtement pour PLL dans cet exemple est de 2 ug/cm2. Il est nécessaire de calculer la quantité de protéines nécessaire en fonction de la surface d'enrobage et du volume d'enrobage.
Par exemple : boîte de Pétri à fond de verre de 35 mm, la zone de croissance cellulaire est de 3,5 cm2, la zone de revêtement est de 4,1 cm2 et le volume de la solution de revêtement est de 400 ul, la posologie recommandée est de 2 ug/cm2. Ensuite, 8,2 ug de PLL sont nécessaires dans un seul puits. Si seulement 400 ul de solution de PLL sont ajoutés, la concentration de la solution de PLL est de 20,5 ug/ml (environ 20 ug/ml). Par conséquent, la solution mère doit être diluée avec de l'eau ultra pure.
Étapes spécifiques :
1. Diluer la solution mère de PLL 1:5 avec de l'eau ultra pure.
2. Ajouter 400 ul de dilution de PLL dans chaque boîte de Pétri à fond de verre de 35 mm.
3. Incuber pendant 1-2 heures à température ambiante et aspirer la dilution PLL.
4. Laver soigneusement 3 fois avec 2 ml de solution PBS ou de milieu sans sérum et aspirer la solution de lavage.
5. Ajoutez directement la suspension cellulaire pour la culture.
Évaluation de la méthode
En raison des propriétés différentes des diverses protéines d'enrobage, différentes protéines d'enrobage sont utilisées de différentes manières. Une nouvelle contamination est souvent créée en raison de la nécessité de recouvrir les plats à fond de verre. De plus, une contamination est souvent découverte après que les cellules ont été soulevées, ce qui non seulement retarde le temps, mais gaspille également les consommables du kit. Après tout, les réactifs protéiques enrobés et les plats à fond de verre de qualité garantie sont chers (les plats à fond de verre de mauvaise qualité peuvent fuir car la colle n'est pas collante ou la colle utilisée est toxique pour les cellules).
Boîtes de Pétri confocales sans revêtement
Pour les enfants qui souhaitent gagner du temps et des efforts, il est plus pratique d'utiliser des boîtes de culture confocale sans revêtement.
Les facteurs à prendre en compte lors du choix d'une boîte de culture appropriée sont les suivants : si elle est adaptée à l'adhésion de vos propres cellules, si les caractéristiques optiques de la boîte de culture répondent aux exigences confocales.
Les boîtes de Pétri qui répondent aux exigences des facteurs ci-dessus ne se limitent pas aux boîtes à fond de verre revêtu. En fait, tout le monde sait que les plats en plastique sont moins chers et plus faciles à adhérer aux cellules que le verre. Voici un exemple de boîte de culture confocale de Shanghai Jingan, pour parler des paramètres qu'une boîte de culture adaptée aux expériences confocales doit avoir :
On peut voir que les paramètres physiques des boîtes de culture confocales qui répondent aux exigences d'utilisation directe sont très proches du verre, mais en même temps, elles ont aussi des propriétés hydrophiles, ce qui peut faire mieux adhérer la plupart des cellules ; et la ductilité sont meilleures que le verre. Il permet à la plupart des lignées cellulaires et des cellules primaires d'adhérer directement à la paroi et n'est pas fragile, ce qui est un bon choix.
Vous pouvez également trouver la boîte de culture confocale la plus adaptée à votre expérience en fonction de vos besoins expérimentaux spécifiques et des paramètres du tableau ci-dessus.
Évaluation de la méthode
Le choix de ce type de boîte de Pétri ne nécessite pas de revêtement supplémentaire, ce qui réduit considérablement le risque de contamination. Et comme le fond en plastique est plus facile à travailler, aucune colle n'est nécessaire pour le fixer au fond de la boîte de Pétri. Éliminer la possibilité de fuite ou de cytotoxicité.
