La technologie PCR est similaire au processus de réplication naturelle de l'ADN et sa spécificité repose sur des amorces oligonucléotidiques complémentaires aux deux extrémités de la séquence cible. La PCR consiste en trois étapes de réaction de base : dénaturation, annelage et extension. Ce processus de réaction est effectué dans le récipient de réaction PCR. Avec le développement continu de l'instrument d'amplification génique, le récipient de réaction a également connu le développement progressif du tube à centrifuger de 1,5 ml à 0.2ml (0.25ml) au {{ à paroi mince 7}}.2ml dédié à la PCR. , 0.Tube de 1mlpcr. Avec l'augmentation du nombre de réactions d'amplification PCR, des conteneurs d'amplification génique à haut débit pour les barrettes PCR et les plaques PCR se forment progressivement.
La PCR consiste en trois étapes de réaction de base : dénaturation-hybridation-extension
Dénaturation de l'ADN matrice :
Une fois que l'ADN matrice est chauffé à environ 94 degrés pendant une certaine période de temps, l'ADN double brin de l'ADN matrice ou l'ADN double brin formé par amplification PCR est dissocié, de sorte qu'il peut être combiné avec l'amorce pour préparer pour le prochain tour de réaction.
Recuit (renaturation) de l'ADN matrice avec des amorces :
Une fois que l'ADN matrice est dénaturé en un seul brin par chauffage et que la température est abaissée à environ 55 degrés, les amorces sont appariées avec la séquence complémentaire du simple brin de l'ADN matrice.
Extension des amorces :
Sous l'action de la Taq, le conjugué ADN matrice-amorce utilise le dNTP comme matière première de réaction pour synthétiser une nouvelle chaîne de réplication semi-réservée complémentaire de la chaîne d'ADN matrice selon le principe d'appariement de bases et de réplication semi-réservée.
Principes de base de la technologie PCR
La technologie repose sur une réaction de synthèse enzymatique d'ADN polymérase en présence d'ADN matrice, d'amorces et de quatre désoxyribonucléotides.
L'ADN polymérase utilise l'ADN simple brin comme matrice pour initier la synthèse avec un petit morceau d'ADN double brin. Une ou deux amorces oligonucléotidiques synthétiques sont combinées avec une séquence complémentaire dans la matrice d'ADN simple brin pour former un ADN double brin partiel.
Sous une température et un environnement appropriés, l'ADN polymérase ajoute un désoxymononucléotide à l'extrémité 3'-OH de l'amorce et l'utilise comme point de départ pour s'étendre le long de la direction 5'→3' de la matrice afin de synthétiser un nouveau brin complémentaire d'ADN .
La différence entre les tubes PCR et les tubes à centrifuger
Tubes PCR :
La plaque de réaction PCR est un 96-puits ou un 384-puits, spécialement conçu pour les réactions par lots. Le principe est que le débit de la machine PCR et du séquenceur est généralement de 96 ou 384.
Tube à centrifuger :
Le tube à centrifuger n'est pas nécessairement un tube PCR. Il existe de nombreux types de tubes à centrifuger en fonction de leur capacité. Les plus couramment utilisés sont de 1,5 ml, 2 ml, 5 ml, 15 ou 50 ml, et le plus petit (250 ul) peut être utilisé comme tube PCR.
Comment choisir les tubes PCR
Nous avons choisi de placer les tubes PCR dans l'espoir de choisir l'emplacement le plus précis pour la température.
La position la plus précise de la température doit être la position au-dessus du capteur de température sous le module (indépendamment de la température imprécise du capteur).
La position du capteur de température des différents instruments PCR est différente.
Par exemple, le 2720 d'AB n'en a qu'un au milieu, le 200 de MJ a trois capteurs, qui sont en bas à gauche, au milieu et en haut à droite, celui d'Eppendorf devrait être dans la rangée A ou H, et le Dongshenglong 811 a trois capteurs de température, B{{3} } doit être sélectionné, C1-2, C6-7, D6-7, B11-12, C11-12, car ces points sont des points ponctuels de température.
