Le milieu de culture cellulaire doit contenir suffisamment de nutriments pour répondre aux substances et à l'énergie nécessaires aux réactions biochimiques telles que la synthèse de nouvelles cellules et le métabolisme cellulaire. Les principaux composants du milieu de culture cellulaire sont l'eau, les acides aminés, les vitamines, les glucides, les sels inorganiques et d'autres nutriments auxiliaires. Par conséquent, nous devons prêter attention à la méthode de stérilisation du milieu de culture cellulaire et aux précautions connexes dans les expériences quotidiennes.
culture de cellules
1. Méthodes de stérilisation et précautions pour différents milieux de culture cellulaire
Les méthodes de stérilisation du milieu de culture cellulaire sont divisées en stérilisation par autoclave et stérilisation par filtration sur membrane. Différents milieux de culture peuvent avoir différentes méthodes de stérilisation en raison de leurs différents nutriments.
Autoclave
Certains milieux, tels que le MEM, peuvent être autoclavés, ces milieux ne contiennent généralement pas de L-glutamine et de bicarbonate de sodium, et sont généralement ajoutés après que le milieu a été autoclavé. De plus, le glutamate à haute pression (tel que la L-alanyl-L-glutamine) peut être utilisé à la place de la L-glutamine. Le milieu autoclavable est entièrement stérilisé avec une perte minimale de nutriments à 121 degrés, 15 psi et 15 minutes, sans prolonger le temps de stérilisation.
La plupart des milieux de culture cellulaire ne conviennent pas à l'autoclavage. Étant donné que le milieu de culture contient souvent des vitamines, des protéines, des polypeptides, des facteurs de croissance et d'autres substances, ces substances sont sujettes à la dénaturation ou à la perte de fonction sous une température élevée ou une exposition aux rayonnements, de sorte que les liquides mentionnés ci-dessus sont principalement filtrés et stérilisés pour éliminer les bactéries. Il existe de nombreuses membranes filtrantes disponibles pour la filtration et la stérilisation, et leurs matériaux sont principalement du PES, du nylon, du polycarbonate, de l'acétate de cellulose, de la nitrocellulose, du PTFE, de la céramique, etc. La stérilisation par filtration sur membrane est une méthode couramment utilisée et pratique à l'heure actuelle. Des membranes filtrantes avec une taille de pores de 0.2 μm sont souvent utilisées, et certaines utilisent une taille de pores de 0.1 μm. Par rapport à la filtration à haute pression, les membranes ont une durée de vie et sont plus chères, mais sont moins destructrices pour les nutriments dans le milieu de culture cellulaire.
2. Précautions lors du stockage des différents milieux de culture cellulaire
Généralement, le milieu de culture cellulaire liquide ne doit pas être congelé à -20 degré, car les nutriments peuvent être précipités pendant la décongélation, ce qui affectera l'effet de culture. Dans des circonstances normales, il doit être stocké à 2 ~ 8 degrés à l'abri de la lumière. Avant utilisation, sortez-le du réfrigérateur et mettez-le à température ambiante pour l'équilibrage. Le milieu liquide usuel est valable 6 à 12 mois. Essayez d'éviter le stockage à long terme du milieu de culture cellulaire liquide. La glutamine qu'il contient se décomposera lentement avec l'extension du temps de stockage. Si la croissance cellulaire n'est pas bonne, vous pouvez envisager de tester la teneur en glutamine dans le milieu pour déterminer s'il faut ajouter de la glutamine. . Le milieu de culture cellulaire liquide disponible dans le commerce a une date de péremption spécifique. Après avoir utilisé un milieu de culture cellulaire en poudre sèche pour préparer le liquide, il doit également être stocké à basse température (2 ~ 8 degrés). En plus de la dégradation facile de la glutamine dans le milieu, d'autres composants dans le milieu peuvent également être dégradés ou précipités avec l'augmentation de la température.
