Le processus de base de la détection PCR du nouveau coronavirus
1. Prélèvement d’échantillons : Prélèvement simultané d’échantillons des voies respiratoires supérieures (y compris le nasopharynx et l’oropharynx) et des voies respiratoires inférieures (y compris les expectorations, l’aspiration trachéale ou le liquide de lavage broncho-alvéolaire) pour la détection du nCoV par RT-PCR. Lorsque des échantillons des voies respiratoires inférieures sont facilement disponibles : utiliser l’EPI approprié pour le prélèvement des échantillons (notez les échantillons URT pour les précautions relatives aux gouttelettes et à l’exposition et les échantillons de TLR pour les précautions en suspension dans l’air) Lors du prélèvement d’échantillons URT, utilisez des écouvillons d’échantillonnage de virus (polyester stérile ou rayonne au lieu de coton) et un milieu de transport du virus. Ne prélevez pas d’échantillons dans les narines ou les amygdales. Pour les patients suspectés de nCoV, en particulier les patients atteints de pneumonie ou les patients sévères, un seul échantillon URT ne peut pas exclure le diagnostic, et il est recommandé d’augmenter les échantillons URT et LRT.
2. Extraction d’acide nucléique: instrument d’extraction d’acide nucléique ou extraction manuelle d’acide nucléique
1), pas besoin d’instruments, utilisez l’extraction manuelle
Équipement et consommables de laboratoire nécessaires à l’extraction des acides nucléiques et à l’isolement des échantillons :
armoires de sécurité biologique (fonctions: séparation des échantillons, mise à disposition de personnel, échantillons et protection de l’environnement),
Centrifugeuse réfrigérée à grande vitesse de bureau (fonction: vitesse ≥ 12000RPM, analyse des acides nucléiques, etc.),
Réfrigérateur basse température (fonction: stockage des réactifs),
Bain métallique, pipette (fonction: dosage précis),
Tubes centrifuges stérilisés (fonction : séparation des acides nucléiques, etc.),
Gants en latex (fonction: anti-pollution),
Éthanol absolu, isopropanol, DNase et eau sans RNase (eau non traitée avec de LAPC).
3. Instrument d’extraction automatique des acides nucléiques: (extraction automatique, 32 échantillons peuvent être extraits une fois en 26 minutes)
La plaque préinstallée correspondante est directement chargée et extraite directement sur la machine :
4. Détection par PCR quantitative par fluorescence :
Équipements et consommables requis: armoire de sécurité biologique (fonction: préparation des échantillons, mise à disposition du personnel, échantillons et protection de l’environnement),
Instrument de PCR quantitative à fluorescence (fonction: détection et analyse d’amplification par PCR),
Centrifugeuse réfrigérée à grande vitesse de bureau (fonction: vitesse ≥ 12000RPM),
Congélateur à basse température (stockage des échantillons à -86 °C, stockage des réactifs à -20 °C et 4 °C),
oscillateur, (mix)
Embouts de pipette gradués (Fonction: Chargement précis), taille 1-10ul
Tubes centrifuges stérilisés (0,5/1,5/2 ml),
Tube / plaque PCR de qualité optique de 0,2 ml (fonction: tube de réaction PCR),
Gants en latex (fonction: anti-pollution).
L’extraction des acides nucléiques, la configuration du système réactionnel et l’interprétation des résultats sont soumises aux instructions du kit.